Test per COVID-19, le indicații ale Ministrului Salutei pentru medici italieni: ecco quali usare e perché
Test per COVID-19, il Ministero della Salute ha diffuso il document „Test di laboratorio per SARS-CoV-2 e loro uso in sanità pubblica”, conținând indicații cu privire la criterii de alegere a testului la dispoziție, pentru un utilizare razionale și sostenibile risorse nei diversi contesti.
E 'il document di referință per i medici italiani, e viene diffuso in Pdf da Fnomceo, la Federazione degli Ordini dei Medici e degli Odontoiatri italiani.
Perché nel mezzo della seconda ondata dell'epidemia di coronavirus, è esențială la alegerea testelor a dispoziției în mai mulți contesti pentru un uz rational și sostenibil delle risorse.
Questo documento riassume le information available to moment della sua pubblicazione e può essere aggiornato se ulterior evidenze scientifiche will available.
Test COVID-19, le indicații ale OMS
Indicatiile riportate în acest document sunt în linie cu indicațiile riportate din Organizația Mondială a Sănătății (OMS) pentru profilurile produselor de diagnosticare pentru care au venit țintă COVID-19 așa că sunt riportate în documentul „Țintește profilurile de produs pentru diagnosticarea prioritară pentru a susține răspunsul la the COVID19 pandemic v.1.0 ”del 28 septembrie 2020 care descrivă caracteristicile principale ale testului pentru SARS-CoV-2, ma che sottolineano chiar și necesitatea că este satisfăcut non solo i criteri de specificitate și sensibilitate, dar și câteva caracteristici de test rapido che ne favorisca l'uso in determinati contesti.
Lo European Center for Disease Prevention and Control (ECDC) riconosce 5 obiective per il testing: controlare trasmissione;
monitorizați incidența, l'andamento și valutare la gravitatea nel tempo;
mitigare l'impatto del COVID-19 nelle strutture sanitarie e socioassistenziali;
detectare cluster o focolai in contesti specifici;
prevenire la (re) introducere nelle aree care au ajuns la un control sustenabil al virusului.
I test COVID-19 în prezent disponibile pentru scopuri de sanitate publică
Attualmente i test can be suddivisi in tre grandi groups: tampone molecolare, tampone antigenico rapido, test sierologici.
COVID-19, il test molecolare prin tampon
Dacă tratați de o indagine moleculare reverse transcription (rt) -Real Time PCR pentru detectarea genomului (RNA) del virus SARS-CoV-2 în campion biologico.
Questa metodica permite di identificare in mod complet specific și sensibil unul o mai geni bersaglio del virus prezente în campion biologic și di misurare in tempo reale concentrația inițială della sequenza target.
I saggi in rt-Real Time PCR, seppur with indications qualitative così come descritti e suggeriti dagli organi internazionali di riferimento, permitono de a obține o curva de amplificare a cui Cycle Threshold o ciclo soglia (CT) è invers proporțional alla quantità del bersaglio genico come stampo inițială prezentă în campionat.
Quindi, in base a questo principio, maggiore è il numero delle “molecole stampo” prezintă inițialmente reacția și minore va fi numărul de cicli necesari pentru a ajunge la un determinat valor di CT.
Viceversa, un înalt valor di CT, obținut după numeroși cicli de amplificare, indica o mică cantitate de target genico inițiale și apoi di genoma virale. La rt-Real Time PCR este „gold standard” pentru diagnosticul de COVID-19.
La rilevazione dell'RNA virale di SARS-CoV-2 executată în laborator da campioni clinici (in genere tamponi nasofaringei o orofaringei) ad today rimane il saggio di referință internazionale pentru sensibilitate și specificitate ed è in grado di rilevare il patogeno anche a bassa carica virale in soggetti sintomatici, pre-sintomatici o asintomatici.
Per la complessità della metodica, la detectare di SARS-CoV-2 vine executată exclusiv în laboratori specializați cu operatori speciali (5).
Il resultato può esser ottenuto in un minimo di 3-5 ore ma situations organizative and logistic can requireere 1-2 days.
È necesar ricordare che ai fini della segnalazione dei casi nel sistema della sorveglianza integrata COVID-19, coordinata da ISS, sunt considerate solo și rezultate pozitive obținute prin rt-Real Time PCR dai laboratori di referință regionale o dai laboratori identificati / autorizzati da aceste ( https://www.epicentro.iss.it/coronavirus/sars-cov-2- sorveglianza).
Dacă adaugă posibilitatea de efectuare a analizei testelor moleculare fără efectuarea estării și a purificării dell'RNA din campion biologic, ma utilizează tehnica de activare a calorii (95 ° C / 98 ° C) („a crudo” ).
Acest lucru permite di simplificare, massimizare și viteza il primului pas dell'analisi stessa, special în condiții de forte presiune asupra laboratorilor dovuti all'aumentare a tamponării procesului.
Il rischio di perdita di sensibilità può considerarsi minimo e presente solo ad alti numeri di cicli di amplificare della PCR, come riportato da lavori scientifici internazionali (6-7).
Cu toate acestea, sensibilitatea este superioră la testul antigenic.
Test antigenic rapid (mediante tampon nazal, naso-oro-faringeo, salivare) pentru Covid-19
Negli ultimi mesi, sunt stati dezvoltati noi tipi di test care promettono di oferte rezultate mai rapid (30-60 minute), cu minor cost și fără necesitatea personală specializată (8).
Questi sunt i test antigenici rapidi, instrumente potențial utile mai ales pentru indagini de screening.
Analogamente ai test molecolari, i saggi antigenici sono di tipo diretto, ossia valutano direct prezența virusului în campion clinic, a diferența testului sererologici care sunt de tip indirecte, cioè detectano la prezența anticorpi specifici care indică o infecție pregresă o in atto .
A diferență de testare a moleculelor, însă, i test antigenici detectanța prezenței virusului nu prin intermediul lui acido nucleico ma prin intermediul lui proteine (antigeni).
Questi test contengono come substrato anticorpi specifici in grado di legarsi agli antigeni virali di SARS-CoV-2 ed il resultato della reazione antigene-anticorpo può fi direct vizibil a occhio nudo o letto printr-o simplă apparecchiatura al “point of care” fără a necesitatea di essere efectuat într-un laborator.
Negli Stati Uniti 3 test antigenici rapidi sunt stati autorizzati da FDA. În Europa, numerosi test hanno già ottenuto il marca CE e diverse companii de diagnosticare stanno lucrând pentru obținerea aprobării normative idonee pentru a fi imediate pe piața cu un grad suficient de affidabilitate (9).
I test antigenici sono di tipo qualitativo (sì / no) e intercettano, prin anticorpi policlonali o monoclonali, specifici peptidi (porții proteiche) della proteina S (Spike) o N (nucleocapside) presenti sulla superficie virale di SARS-CoV-2.
Il test può rezultare negativ se concentrația antigeni è inferioară al limite di rilevament del test (es. Se il prelievo è stato executat troppo precocemente rispetto all'ipotetico moment di esposizione) o se il campione è stato prelevat, transportat sau conservat impropriamente.
Pentru acest lucru, i producătorii de astfel de kit evidențiază că un rezultat negativ al testului nu exclude posibilitatea unei infecții da SARS-CoV-2 și negativitatea campionului, a frontului de forte suspecte de COVID-19, trebuie să fie confirmat prin test molecolare.
I test molecolari sembrano avere una maggiore sensibilitate prima della comparsa dei sintomi, mentre in fase inițiale imediat succesiva inițială a infecției i test rapidi antigenici și cei moleculari au o sensibilitate similară, rendindu-se utilă și utilizatorii și primi (2).
În plus, il test rapido antigenico può essere folosit pentru l'identificazione dei contatti asintomatici dei casi, anche se questo tipo di test non è specificamente autorizat per questa destinatie d'uso, poiché è stato demonstrato che i casi asintomatici hanno cariche virali similar ai casi sintomatici (10).
Purtroppo, fino ad oggi non vi sono sufficienti studi publicati che, a fronte di contesti specifici e di una ampia casistica, furniscano indicații asupra sensibilității și specificității acestor teste rapide.
Allo stato attuale, i dati available of vari test for these parametri sono those dichiarati dal produttore: 70-86% pentru sensibilitate și 95-97% pentru specificitate (11-14)
La Foundation for Innovative New Diagnostics (FIND) (https://www.finddx.org/covid19/pipeline/?section=show-all#diag_tab) a creat o platformă online în rapidă evoluție care să colecteze o serie de seturi pentru SARS -CoV-2 care vanno dalle prime fasi di dezvoltare fino alla piena aprobare normativa.
Riguardo i test su tampone salivare, il dispozitiv de detectare è lo stesso, ma schimbând campionul analizat pot schimba caracteristicile de sensibilitate și specificitatea testului.
În concluzie, sensibilitatea și specificitatea di aceste test antigenici rapide trebuie să fie evaluate pentru i lor valori predeterminate în cursul lor de dezvoltare tehnologică.
È important la condivisione dei dati a livello locale / regionale / nazionale delle validations su vari tipi di test antigenici rapidi, inclusiv a celor salivari, in comerțul nostru paese.
Test sierologici
I test sierologici rilevano l'esposizione al virus SARS-COV- 2 ma non sono in grado di confermare o meno una infection in atto.
Per acest lucru, în caz de pozitivitate și de necesitate pentru un test molecolar su tampon pentru conferma.
Come da circolare del Ministero della Salute 16106 del 9 maggio 2020, si ribadisce che “la calitate e l'affidabilità di un test dipendono in special dalle due caratteristiche di specificitate e sensibilitate, e pertanto, sebbene non sussistano in relatie ad esse obligatorii di legge , è fortemente raccomandato utilizizzo di test del tipo CLIA e / o ELISA care abbiano una specificitate non inferioară al 95% e una sensibilitate non inferioară al 90%, al fine di ridurre il number of results falsi positivi e falsi negativi.
Al di sotto di queste soglie, l'affidabilità del resultato ottenuto non è adeguata alle finalità per cui i test sunt executate ”.
Documentul complet în materie de testare pentru COVID-19 publicat de FNOMCEO și referință pentru medici italieni
Copia_DocPrincipale_COVID_19__test_v4k_lastTest COVID-19, bibliografie
1. Organizația Mondială a Sănătății. Direcționați profiluri de produse pentru diagnostice prioritare
ticuri pentru a sprijini răspunsul la pandemia COVID-19 v.1.0. Geneva: OMS; 2020
2. Mina MJ, Parker R, Larremore DB. Regândirea sensibilității testului Covid-19 - O strategie de izolare. N Engl J Med 2020 30 sept. DOI: 10.1056 / NEJMp2025631
3. Comisia Europeană. Performanța actuală a metodelor și dispozitivelor de testare COVID-19 și a criteriilor de performanță propuse (16 aprilie 2020). Bruxelles: CE; 2020. https://ec.europa.eu/docsroom/documents/40805.
4. Comisia Europeană. COVID-19 in vitro dispozitive de diagnostic și bază de date cu metode de testare. Bruxelles: CE; 2020. https://covid-19-diagnostics.jrc.ec.europa.eu/ ).
5. Ministero della salute. Pandemia di COVID-19 - Aggiornamento delle indications sui test diagnostici e sui criteri da adoptate nella determinazione delle questions. Aggiornamento delle indications relative alla diagnosticosi di laboratorio (0011715-03 / 04/2020). Roma: Ministero della Salute; 2020.
6. Mancini F, Barbanti F, Scaturro M și colab. Managementul de laborator pentru detectarea SARS-CoV-2: o combinație ușor de utilizat a abordării tratamentului termic și a testării PCR în timp real. Emerg Microb Infect. 2020; 9 (1): 1393- 1396. DOI: 10.1080 / 22221751.2020.1775500.
7. Fomsgaard AS, Rosenstierne MW. Un flux de lucru alternativ pentru detectarea moleculară a SARS CoV-2 - evadarea din lipsa kitului de extracție NA, Copenhaga. Danemarca. Euro Surveill. 2020; 25: 2000398. doi: 10.2807 / 1560- 7917.ES.2020.25.14.2000398
8. Cheng MP, Papenburg J, Desjardins M, și colab. Testarea diagnosticului pentru Coronavirus-2 legat de sindromul respirator acut sever: o revizuire narativă [publicată online înainte de tipărire, 2020 aprilie 13]. Ann Intern Med. 2020: M201301 10.7326 / M20-1301.
9. Centre pentru controlul și prevenirea bolilor. Prezentare generală a testării pentru SARS-CoV-2 (COVID-19). Atlanta, GA: CDC; 2020. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/hcp/testing-overview.html
10. Organizația Mondială a Vindecării. Detectarea antigenului în diagnosticul infecției cu SARS-CoV-2 folosind imunoanalize rapide. Îndrumări intermediare. Geneva: OMS; 2020. https://www.who.int/publications/i/item/antigendetection-in-the-diagnosis-of-sars-cov-2infection-using-rapid-immunoassays
11. Dinnes J, Deeks JJ, Adriano A, Berhane S, Davenport C, Dittrich S, Emperador D, Takwoingi Y, Cunningham J, Beese S, Dretzke J, Ferrante di Ruffano L, Harris IM, Price MJ, Taylor-Phillips S , Hooft L, Leeflang MMG, Spijker R, Van den Bruel A. Antigen rapid, punct de îngrijire și teste moleculare pentru diagnosticarea infecției cu SARS-CoV-2. Baza de date Cochrane de revizuiri sistematice 2020, numărul 8. Art. Nr .: CD013705. DOI: 10.1002 / 14651858.CD013705
12. Castro R, Luz PM, Wakimoto MD, Veloso VG, Grinsztejn B, Perazzo H. COVID-19: o meta-analiză a preciziei testului de diagnostic al testelor comerciale înregistrate în Brazilia [publicat online înainte de tipărire, 2020 18 aprilie]. Braz J Infect Dis. 2020; S14138670 (20): 530029. DOI: 10.1016 / j.bjid.2020.04.003
13. Russo A, Minichini C, Starace M și colab. Starea actuală a diagnosticului de laborator pentru COVID-19: o analiză narativă. Infectați medicamentele. 2020; 13: 2657-2665. doi: 10.2147 / IDR.S264020
14. Conducta de diagnostic SARS-CoV-2. https://www.finddx.org/covid-19/pipeline/ .
Pentru a aprofunda:
Il tampone salivare per i bambini inventat da 4 știința (e mamă) di UniMi